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PNGase F来源于Elizabethkingia miricola，是一种高效的酰胺水解酶，可以裂解由天冬酰胺连接的高甘露糖、杂合和复杂的寡糖糖蛋白。PNGase F的切割位点为糖蛋白内侧N-乙酰葡萄糖（GlcNAc）和天冬酰氨残基之间的酰胺键，同时将酶解后蛋白上的天冬氨酰转化为天冬氨酸。

本制品通过大肠杆菌重组表达，带有His标签，不含甘油，常应用于抗体及其相关蛋白去糖基化。使用过程中避免反复冻融。

• 蛋白纯度检测：使用SDS-PAGE凝胶电泳检测，蛋白纯度不低于95%。
  
• 糖苷酶与蛋白酶活性检测：无可检出的内切糖苷酶F1、F2或F3活性；无可检出的蛋白酶活性。

• 变性条件下去糖基化
  
  • 将1～20μg糖蛋白，1μL 10×Denaturing Buffer和ddH2O（如有必要）混合至总体积10μL；
    
    • 10×Denaturing Buffer在低温储存时可能出现白色沉淀，使用前可先在37℃下温育使其溶解。
  • 100℃反应10min使糖蛋白变性后，冰上冷却，离心10 s；
    
  • 加入2μL 10×PNGase F Buffer，2μL 10% NP-40，补充ddH2O使总反应体积为20μL；
    
  • 加入1～2μL PNGase F，轻轻混匀，37℃孵育1~3h。
• 非变性条件下去糖基化
  
  • 将1～20μg糖蛋白，2μL 10×PNGase F Buffer和ddH2O（如有必要）混合至总体积20μL；
    
  • 加入2～5μL PNGase F，轻轻混匀；
    
  • 37℃孵育4~24h。
• PNGase F的去除
  本制品带有His标签，反应后可选择与目标糖蛋白不同的标签，通过亲和层析将PNGase F去除。